以下是ELISA實驗中判斷空白孔陽性的標準及處理流程:
一、空白孔陽性判定標準?
吸光度(OD值)閾值?
空白孔OD值超過陰性對照平均值3倍標準差(3SD)
或OD值>0.15(需根據試劑盒說明書調整)
顏色異常?
肉眼觀察空白孔出現明顯藍色(未加終止液時)或黃色(已終止)
二、空白孔陽性原因分析?
試劑污染?
酶標二抗非特異性結合(需驗證抗體特異性)
底物溶液氧化變質(顯色液變黃或渾濁)
操作誤差?
洗滌不導致殘留酶標抗體
封板膜破損導致塵埃污染
三、處理步驟?
步驟? ?操作要點?
1. 復測驗證? 重新加樣檢測空白孔,若重復出現陽性則判定系統污染
2. 排查污染源? 檢查試劑有效期、更換新批次酶標板、驗證洗滌流程
3. 數據修正? 若無法排除污染,需以本批實驗的陰性對照OD值為基線重新計算樣本結果
注:競爭法ELISA中空白孔陽性需特別關注標準品梯度是否異常。
注:以上資料僅供參考,具體詳情來咨詢技術 老師或品牌供應商。
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