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影響ELISA試劑盒試驗成果的要素

更新時間:2025-06-26  |  點擊率:759

  影響ELISA試劑盒試驗成果的要素

 

  以下是天正信達對影響ELISA試劑盒試驗成果的關鍵要素及控制方法,綜合多篇文獻整理:

  一、試劑相關因素

  抗體/抗原質量‌

  抗體效價下降或交叉反應會導致假陽性/假陰性

  控制方法:選擇高特異性抗體,避免使用過期試劑

  酶結合物濃度‌

  濃度過高易致背景信號增強,過低則靈敏度下降

  控制方法:嚴格按說明書稀釋,不同批號禁止混用

  試劑保存條件‌

  未避光保存或反復凍融會使底物失效

  控制方法:開封后1個月內用完,酶標試劑需-20℃保存

  二、樣本處理因素

  溶血/脂血干擾‌

  血紅蛋白類過氧化物酶活性會干擾HRP系統

  控制方法:3000g離心20分鐘去除雜質

  反復凍融‌

  超過3次凍融可使蛋白降解(尤其細胞因子)

  控制方法:分裝凍存于-80℃,避免溫度波動

  抗凝劑選擇‌

  EDTA會抑制HRP活性,肝素增加OD值

  控制方法:血清樣本優先,血漿需匹配抗凝劑類型

  三、操作技術要點

  加樣準確性‌

  移液器未校準可使誤差>5%(尤其微量樣本)

  控制方法:每年校準移液器,加樣至孔底1/3處

  溫育控制‌

  溫度波動>1℃或未密封會導致"邊緣效應"

  控制方法:使用水浴箱,禁止疊放反應板

  洗滌充分性‌

  殘留洗滌液會增高背景(假陽性)

  控制方法:手工洗板需拍干,洗板機檢查針頭堵塞

  四、儀器與環境

  酶標儀校準‌

  濾光片波長偏差(如TMB用450nm非490nm)

  控制方法:開機預熱15分鐘,定期校驗

  溫濕度控制‌

  濕度>70%易致板條受潮,<40%加速液體蒸發

  控制方法:實驗室維持45%-65%濕度

  五、特殊注意事項

  組織樣本處理‌

  假陽性排查‌

  類風濕因子干擾需用阻斷劑處理

  驗證方法:加標回收率測試(80%-120%)

  關鍵建議‌:

  每板設置復孔(CV<15%)和陰陽性對照

  顯色時間控制在10-15分鐘,強陽性孔提前終止

  優先選擇被CNS論文引用的試劑盒品牌

  注:以上資料僅供參考,具體請咨詢技術老師或品牌供應商。

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