天正信達(dá)解說(shuō)ELISA試劑盒容易操作失誤的地方

　　以下是天正信達(dá)對(duì)ELISA試劑盒操作中容易失誤的關(guān)鍵環(huán)節(jié)及專業(yè)解決方案，綜合實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)和常見(jiàn)問(wèn)題整理：

　　一、試劑準(zhǔn)備階段

　　試劑平衡不足?

　　未室溫平衡30分鐘直接使用，導(dǎo)致反應(yīng)溫度不均(尤其HRP酶在低溫下活性降低)

　　解決方案：提前取出試劑盒，平衡至22-25℃后再開(kāi)封

　　標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶錯(cuò)誤?

　　凍干粉未離心溶解或使用非配套稀釋液，造成濃度偏差

　　解決方案：復(fù)溶前3000rpm離心1分鐘，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)體積稀釋

　　二、樣本處理環(huán)節(jié)

　　血清分離不當(dāng)?

　　血液未充分凝固(<30分鐘)或離心力不足(<2000g)，導(dǎo)致纖維蛋白原殘留引發(fā)假陽(yáng)性

　　解決方案：37℃靜置1-2小時(shí)后，3000g離心20分鐘

　　樣本保存失誤?

　　反復(fù)凍融(>3次)或-20℃保存超1個(gè)月，使抗原降解

　　解決方案：分裝凍存于-80℃，避免凍融循環(huán)

　　三、加樣操作要點(diǎn)

　　移液器使用錯(cuò)誤?

　　未校準(zhǔn)移液器或吸頭密封不嚴(yán)，導(dǎo)致加樣量波動(dòng)(誤差>5%)

　　解決方案：每年校準(zhǔn)移液器，加樣時(shí)吸頭緊貼孔底避免氣泡

　　加樣順序混亂?

　　先加酶標(biāo)抗體后加樣本，造成非特異性結(jié)合

　　解決方案：嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)"樣本→抗體→底物"順序操作

　　四、溫育過(guò)程控制

　　溫度與時(shí)間偏差?

　　使用普通培養(yǎng)箱(非水浴箱)導(dǎo)致溫度波動(dòng)>1℃

　　解決方案：校準(zhǔn)孵育箱溫度，禁止疊放反應(yīng)板

　　蒸發(fā)問(wèn)題?

　　未使用濕盒或封板膜，邊緣孔液體蒸發(fā)致濃度升高

　　解決方案：孵育時(shí)反應(yīng)板置于鋪濕紗布的密閉盒內(nèi)

　　五、洗滌與顯色

　　洗滌不?

　　手工洗板拍打力度不均或洗板機(jī)針頭堵塞，殘留物增加背景

　　解決方案：每孔注滿洗液，靜置1分鐘后拍干

　　顯色控制不當(dāng)?

　　顯色超過(guò)15分鐘未終止，導(dǎo)致OD值飽和

　　解決方案：每隔5分鐘觀察顏色變化，強(qiáng)陽(yáng)性孔提前終止

　　六、數(shù)據(jù)讀取誤區(qū)

　　讀板延遲?

　　終止反應(yīng)后>10分鐘讀數(shù)，酸性環(huán)境使顯色物分解

　　解決方案：終止后5分鐘內(nèi)完成讀數(shù)

　　波長(zhǎng)設(shè)置錯(cuò)誤?

　　TMB底物誤用490nm(正確應(yīng)為450nm)

　　解決方案：核對(duì)酶標(biāo)儀濾光片匹配底物類型

　　關(guān)鍵建議?：

　　每批次實(shí)驗(yàn)設(shè)置復(fù)孔(CV<15%)和質(zhì)控品

　　不同批號(hào)試劑禁止混用，開(kāi)封后1個(gè)月內(nèi)用完

　　溶血/脂血樣本需離心過(guò)濾后檢測(cè)

　　注：以上資料僅供參考，具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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