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ELISA實驗要點：血液樣本收集/處理簡要?
在ELISA實驗中，血液樣本的收集至關重要。需使用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集靜脈血，室溫放置1小時或4℃過夜，使血清析出。隨后，在2-8℃條件下以1000×g離心20分鐘，收集上清液作為血清樣本。若采集血漿，則需使用含抗凝劑的采血管，采集后30分鐘內，在4℃條件下以1000×g離心15分鐘，取上清液。此外，還需注意避免溶血和細菌污染，溶血會釋放具有過氧化物酶活性的物質，細菌可能含有內源性HRP，這些都會影響檢測結果。處理后的血清或血漿應分裝保存于-20℃或-80℃，避免反復凍融。
ELISA實驗的血液樣本收集與處理是確保實驗結果準確的關鍵步驟，以下為簡要操作要點：
一、血液樣本收集
采集類型：
血清：用于檢測抗體、抗原等(如無抗凝管采集)。
血漿：需抗凝劑(如EDTA、肝素、檸檬酸鈉)防止凝固，用于特定分子檢測(如細胞因子)。
注意事項：
無菌操作：避免污染。
采血管選擇：根據檢測目標選擇抗凝劑(避免EDTA干擾某些酶聯反應)。
采集量：通常3-5mL，避免溶血或脂血(影響吸光度)。
二、樣本處理
血清制備：
血液靜置30-60分鐘(室溫凝固)。
離心(2000-3000×g，10-15分鐘，4℃或室溫)。
吸取上清(血清)，避免觸碰沉淀或脂層。
血漿制備：
采血后立即輕柔顛倒混勻抗凝劑。
離心(同上條件)分離血漿。
分裝保存：
分裝至無菌EP管(避免反復凍融)。
短期(24-48小時)：4℃保存。
長期：-20℃(1個月內)或-80℃(更久)，標記日期/樣本信息。
三、關鍵控制點
避免溶血/脂血：離心后若血清呈紅色或渾濁，可能影響OD值。
及時處理：血液室溫放置≤2小時，否則釋放代謝物干擾結果。
凍融次數：≤3次，建議分裝小體積。
四、實驗前準備
檢測前樣本需平衡至室溫，離心去除沉淀(尤其凍存樣本)。
高脂樣本可過濾或超速離心澄清。
規范化的樣本處理可顯著減少ELISA的假陽性/假陰性風險。根據具體試劑盒要求調整細節(如某些檢測需特殊抗凝劑)。
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