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SDS-PAGE凝膠電泳的操作步驟
SDS-PAGE凝膠電泳是一種廣泛用于蛋白質分離和分析的技術，以下是天正信達技術小編對其詳細操作步驟：
1. ?樣品制備?
裂解?：使用裂解緩沖液將細胞或組織裂解，釋放蛋白質?。
變性?：加入SDS和還原劑(如β-巰基乙醇或DTT)，使蛋白質變性并帶上負電荷?。
煮沸?：將樣品在95°C加熱5-10分鐘，確保蛋白質變性?。
2. ?凝膠制備?
分離膠?：根據蛋白質分子量范圍，配制適當濃度的分離膠(如10-15%)。將分離膠溶液灌入玻璃板之間，用水或異丙醇覆蓋頂部，待其凝固?。
濃縮膠?：配制濃縮膠(如4%)，灌入分離膠上方，插入梳子，待其凝固后形成樣品孔?。
3. ?電泳槽準備?
組裝?：將制備好的凝膠放入電泳槽，確保玻璃板正確對齊?。
加緩沖液?：加入電極緩沖液，確保內外槽液面齊平?。
4. ?加樣?
樣品上樣?：將變性后的樣品與上樣緩沖液混合，用微量移液器小心加入凝膠孔中?。
Marker?：在同一凝膠中加入蛋白Marker，作為分子量標準?。
5. ?電泳?
連接電源?：將電泳槽與電源連接，初始電壓設置為80V，待樣品進入分離膠后調整為150V?。
電泳?：在電場作用下，蛋白質根據分子量大小在凝膠中分離?。
6. ?染色與脫色?
固定?：電泳結束后，將凝膠從玻璃板上剝離，放入固定液中?。
染色?：使用考馬斯亮藍等染料對蛋白質進行染色?。
脫色?：去除背景染色，使蛋白質條帶清晰可見?。
7. ?成像與分析?
成像?：使用凝膠成像系統對染色后的凝膠進行成像?。
分析?：根據蛋白質條帶的位置和強度，分析目標蛋白的分子量和表達水平?。
以上步驟涵蓋了SDS-PAGE凝膠電泳的主要操作流程，確保實驗的準確性和可重復性?。
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